Просекатель stanley: Просекатель для монтажа металлических конструкций Stanley 1-69-100 — цена, отзывы, характеристики, фото

Просекатель (щипцы) для монтажа металлических каркасов Stanley Stud Crimping Tool 1-69-100 / 260 мм

ОСНОВНЫЕ ДАННЫЕ
Тип изделия	Монтажный инструмент
Класс	Профессиональный инструмент
Родина бренда	Соединённые Штаты
ТЕХНИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Материал рукоятки	Обрезиненный пластик
Материал корпуса	Металл
ГАБАРИТНЫЕ РАЗМЕРЫ И ВЕС
Габаритная длина	260 мм

Просекатель (щипцы) для монтажа металлических каркасов Stanley Stud Crimping Tool 1-69-100 / 260 мм

Профессиональный инструмент понадобится каждому мужчине во время выполнения ремонтных работ. Этот просекатель для установки каркасов из металла обладает такими преимуществами:
•    корпус инструмента выполнен из высокопрочного металла, что позволит работать с материалом любой толщины;
•    монтажный инструмент дает возможность монтировать разнообразные каркасы любых габаритов и конфигураций;

•    в рукоятке присутствует прорезиненная вставка, поэтому пользоваться инструментом намного комфортнее.
Вы можете посмотреть каталог на нашем сайте, чтобы сделать правильный выбор. Стоимость товаров приемлемая, что гармонично сочетается с их наивысшим уровнем качества. Мы доставляем продукцию по городам Украины.

— 

Просекатель для металлического профиля под гипсокартон: виды и характеристики

ПОДЕЛИТЕСЬ
В СОЦСЕТЯХ

Использование гипсокартона в строительстве и отделке помещений различного типа привело к его широкому применению. Фигурные потолки и установка перегородок – далеко не весь перечень его назначения. Если последние можно сделать, не прибегая к многочисленным операциям, то для установки новой стенки понадобится металлический профиль. Облегчить и ускорить монтаж новых стен поможет просекатель для металлического профиля под гипсокартон.

Прошивочник позволяет быстро и удобно монтировать профильный каркас

Назначение инструмента

Установка перегородок и новых стен требует наличия ручного или электрического шуроповерта, отвертки и множества крепежных деталей. Избавиться от трудоемкой и лишней работы поможет просекатель для металлического профиля, предназначенный скрепить гипсокартонный лист с металлической рейкой.

С помощью просекателя можно соединять профили без саморезов

Данный инструмент отличается легкостью эксплуатации, не требует каких-либо специальных знаний. Технически его использование напоминает работу канцелярского дырокола или степлера. Прочная сталь функционирующей части и резиновые рукоятки рассекателя металлических конструкций делают его использование не только надежным и быстрым, но и приятным.

Прошивочник каркасов выпускается трех опорных модификаций, таких как:

• ручной, производящий самостоятельные крепежные операции, но его возможности минимальны;
• усиленный профессиональный рассекатель со съемными рабочими элементами, предназначен для сложного профиля, за счет более совершенного повышенного усилия;
• профессиональный, использует многоступенчатость рычагов для передачи механического усиления рабочему элементу – пробойнику.

Последний отличается от упомянутых выше аналогов высокой ценой и массой, используется на строительных объектах, при крупных ремонтных операциях. Представляет некоторую сложность в эксплуатации.

После пробивки прошивочник оставляет ровные и аккуратные отверстия

Принцип действия просекателя для профиля

Механизм действия просекателя для гипсокартона и его внешний вид напоминает работу клещей или трубного рычажного ключа, используемых при монтаже оборудования. Рабочими поверхностями рассекателя являются две своеобразных губы. На одной из них крепится пробойник, вторая же исполняет роль упора, в которой сделано углубление под диаметр режущего элемента. Механизм действия инструмента довольно простой:

• совместить монтируемые детали, наложив одну поверх другой;
• завести место соединения между губками клещей;
• резко с усилием свести ручки инструмента вместе.

Отстранив рассекатель от металлических реек, можно обнаружить отверстие, которое фиксирует деталь в нужном положении. В зависимости от типа своеобразного зенкера, кромки отверстий загибаются и образуют сцепленные лепестки, чем улучшается качество крепежа. Толщина совмещенных планок варьируется от 0,55 до 1,5 мм, диаметр отверстия также зависит от находящихся в комплекте сменных пробойников – 2-5 мм.

Принцип действия просекателя для металлического профиля

Важно! Прежде чем купить просекатель для металлического профиля под гипсокартон, необходимо знать толщину пробиваемого металла и фронт предстоящих работ.

Это позволит уменьшить траты и сэкономить время.

Преимущества прошивателя

Главное достоинство рассекателя заключается в том, что крепеж производится без дополнительных метизов – саморезов. Вкручивание крепежного шурупа и его вывинчивание при неправильной установке занимает много времени. К тому же лишние операции грозят превратить не только каркас, но и гипсокартон в сплошное решето. Лист при этом не испытывает лишнего давления, поэтому какая-либо деформация исключается, делая монтаж быстрым и беспроблемным.

Отсутствие выступа шляпки шурупа также добавляет большой плюс в пользу рассекателя, делая прилегание ГКЛ более плотным. Инструмент механического принципа действия не требует электропитания, делая его незаменимым при отсутствии или отключении электроэнергии во время ремонта. Да и тянущиеся по полу провода или расположенные в стенной штрабе кабели представляют некоторую угрозу для жизни при монтаже простенков или утеплении стен.

Небольшим прошивочником можно работать одной рукой

Выбор инструмента

Цена просекателя для профиля гипсокартона зависит, прежде всего, от его типа: ручного, усиленного или профессионального.

Их сравнительные параметры приведены в таблице ниже. Необходимо учесть целевое назначение зенкера, вид предполагаемых работ и их объем. Немаловажное значение на цену оказывает марка инвентаря, фирма производитель. Конечно, лучше немного дороже заплатить за один качественный рассекатель, чем покупать второй, взамен развалившегося на части первого.

Покупательские характеристики прошивочников:

Тип	Ручной	Усиленный	Профессиональный
Габариты	+	+	—
Срок службы	—	+	+
Цена	+	+	—
Популярность	+	+	—
Работоспособность	—	+	+

 

Остановившись на приведенных характеристиках, можно вынести следующее заключение:

• ручной инструмент популярен среди мастеров-любителей, небольшая цена и внешние размеры делают его удобным в домашних условиях, когда идет речь о периодическом монтаже или некапитальном ремонте;
• усиленный и удобный в эксплуатации пригодится небольшой бригаде строителей, занимающейся ремонтом квартир, других жилых или хозяйственных помещений, его умелое применение позволит надолго забыть о крепежных шурупах;
• масштабные проекты, капитальное строительство, переустройство стен помещений только под силу профессиональному просекателю для профиля, имеющего в комплекте несколько сменных пробойников и губ с углублениями под них.

Монтаж профильного каркаса с применением профессионального просекателя

Если два первых инструмента привлекают ценой и сравнительно небольшими габаритами, то последний имеет длительный срок эксплуатации и многофункциональность. Но здесь необходимо отметить, что взаимозаменяемостью комплектующих деталей он не отличается. Вплоть до того, что некоторые марки рассекателей предназначены для работы с каркасом одноименного производителя. Таким образом, прежде чем купить просекатель для соединения профилей, нужно определиться с его типом, функциональностью и предполагаемым назначением.

Обратите внимание! Использование инструмента не требует специальной подготовки, но подразумевает соблюдение минимальных правил техники безопасности. До приобретения первичных навыков работы, крепеж реек желательно производить в хлопчатобумажных защитных перчатках.

Правила эксплуатации

Рассекатель металлических реек довольно простой в использовании инвентарь, но работая с ним, желательно соблюдать некоторые правила эксплуатации. Например:

• для создания хорошего отверстия или качественного крепления необходимо пользоваться приспособленным для данной толщины металла инструментом;

Процесс строительства гипсокартонной перегородки с помощью прошивочника

• нежелательно совершать резкие движения во время пробоя, это приводит к некачественному прорезу рейки;
• запрещается совершать удары молотком по губкам инструмента для увеличения силы пробоя;
• прошивочник необходимо устанавливать строго перпендикулярно по отношению к прорезаемым поверхностям реек;
• нельзя совершать пробой бороздки в местах стыковки или прироста металлических профилей;
• оси подвижной ручки и ролика нужно регулярно смазывать подходящим для этого маслом или другой пластичной массой.

Бережное отношение к зенкеру позволит значительно увеличить срок его службы, упростит и ускорит работу по креплению ГКЛ к профилю. Некоторые мастера относятся к новшествам ремонта помещений с толикой недоверия, предпочитая проводить его дедовскими методами. Упомянутый рассекатель исключением не является. Однако вряд ли усиленное вкручивание самореза, а затем такое же вывинчивание при срыве его шляпки или неправильном входе метиза в соединяемые детали ускорит продвижение ремонта. Главное купить просекатель для профиля подходящего типа. Сделать это можно в любом специализированном магазине.

В зависимости от модели, просекатель может оставлять круглые или прямоугольные отверстия

Обратите внимание! Следует использовать просекатель для металлического профиля под гипсокартон только тех параметров, которые предназначены для пробоя определенной толщины металла. Несоблюдение правил эксплуатации приведет инструмент к сокращению срока службы, его поломке.

Просекатель для металлического профиля под гипсокартон: обзор производителей

Строительные специализированные магазины изобилуют различными типами рассекателей оцинкованных каркасов, торговыми марками производителей. Как и любой инструмент, каждый из них обладает своими достоинствами и недостатками. Предлагаем рассмотреть некоторые торговые марки инструмента.

Просекатель КНАУФ

Данный строительный инвентарь удобно производит монтаж оцинкованных реек для крепления ГКЛ. Клещи облегчают разметку материала и контроль крепежа. Позволяют удерживать гипсокартонные листы вертикально во время монтажа простенков, транспортировать их в таком положении и наносить разметочные линии на плоских поверхностях.

Прошивочник Knauf имеет простую конструкцию, однако очень эффективный в работе

Инструмент Штанцанге от Knauf – один из самых незамысловатых образцов аналогичного ряда, собственно, модель состоит всего лишь из трех элементов:

• скоба с губками и неподвижным рычагом-ручкой;
• подвижный рычаг-ручка, снабженная передаточным устройством;
• боек.

Простота агрегата позволяет также использовать его в качестве отвеса при монтаже реек на потолке. Конструктивное решение добавляется тем, что Штанцанге выдержит подвешенную на него инструментальную сумку, шуруповерт, другие инструменты на монтажном поясе ремонтника.

Просекатель KNIPEX

Немецкий производитель метизов давно зарекомендовал себя на рынке с положительной стороны. Клещи предназначены фиксировать направляющие способом прореза с отгибом лепестков оцинковки. Помогут домашнему умельцу проводить небольшие ремонты помещений без использования шурупов и других крепежных изделий, что в значительной мере увеличит производительность работы, допуская ее проводить одной рукой.

Просекатель Knipex легко справляется с металлом толщиной до 1,2 мм

Данный заклепочник в состоянии скрепить не только рейки, но и листы металла общей толщиной 1,2 мм, благодаря специальной оксидированной стали, идущей на изготовление прошивателя. Специфический рычажный механизм снижает усилие при пробое материалов, облегчая тем самым прокалывание, а покрывающий ручки многокомпонентный пластик позволит легко удержать рассекатель в руках. Инструмент комплектуется металлической петлей для надежного хранения в закрытом положении, предотвращающей самопроизвольное раскрытие.

Статья по теме:

Эксплуатационные характеристики:

• толщина прокалываемого соединения – 1,2 мм;
• размер – 250 мм;
• нетто-вес – 675 г;
• продуцент – Германия.

Положительные отзывы специалистов и мастеров-профессионалов только улучшают характеристику прошивочника.

Монтаж профиля с использованием прошивочника Knipex

Просекатель MATRIX

Данный метиз облегчит работу новичка или профессионала при фиксировании стоечных или потолочных направляющих во время проведения ремонта. Конструктивным дополнением служит возможность подрезать, изгибать и формовать углы оцинкованных профилей. Купите просекатель для профиля гипсокартона данной фирмы, и вы навсегда позабудете о выскользнувших из рук саморезах, неправильном их вкручивании, ведущему к увеличению ненужных отверстий. Упомянутый бренд отличается простым использованием метиза, эффективностью, износостойкостью к кислотам, большим сроком службы.

Эксплуатационные характеристики:

• толщина прокалываемого соединения – 0,6 мм;
• размер – 250 мм;
• нетто-вес – 1,75 кг;
• пуансон – инструментальная сталь У8;
• рычаги – эргономические;
• покрытие рычагов – резина;
• функциональность – одной рукой;
• продуцент – Китай.

Просекатель Matrix снабжен эргономическими прорезиненными рукоятками

Отверстие пробоя характеризуется чистой без заусениц поверхностью, появлением двух отогнутых в стороны лепестков, отсутствуют вмятины на поверхности скрепленных деталей.

Просекатель STANLEY

Американский производитель STANLEY пользуется заслуженной славой среди изготовителей различных видов инструментов. Усиленная модель пробойника этой фирмы исключением не является. Используется при монтажных работах, строительстве, ремонте и перепланировке помещений. Предназначен для скрепления U-образных стоечных или направляющих каркасов под гипсокартонные плиты.

Инструмент снабжен мощным передаточным механизмом, подвижные эргономические прорезиненные ручки-рычаги позволяют удерживать его одной рукой, что очень важно при проведении ремонта в одиночку. Немаловажным дополнением является наличие фиксирующей скобы для надежного хранения в компактном нерабочем положении.

Прошивочником Stanley можно работать одной рукой

Эксплуатационные характеристики:

• толщина прокалываемого соединения – 1,2 мм;
• размер – 240 мм;
• нетто-вес – 730 г;
• материал изделия – инструментальная сталь;
• материал рабочей поверхности – оксидированная сталь;
• покрытие – черный лак;
• покрытие рычагов – резиновое двухкомпонентное;
• функциональность – одной рукой;
• продуцент – США, Тайвань, Китай.

Рассекатель устойчив к механическим ударам, кислотной и щелочной коррозии, повышая, таким образом, длительность эксплуатации.

Обратите внимание! Просекатель для металлического профиля под гипсокартон рекомендуется покупать только в специализированных магазинах строительных принадлежностей. Это обезопасит вас от подделки и лишней траты денег.

Просекание профиля с применением инструмента Stanley

Просекатель ЗУБР

Профессиональный российский заклепочник обеспечивает быстрое скрепление тонкостенных оцинкованных реек толщиной 1 мм. Применяется при монтажных работах капитального строительства и ремонта. Прочное соединение обеспечивается пробоем отверстия диаметром до 1,5 мм с последующим загибом лепестков на тыльной стороне каркаса без использования шурупов-саморезов.

Инструмент комплектуется набором сменных пуансонов различного диаметра из высокопрочной стали. Прорезиненные рукоятки-рычаги предотвращают выпадение метиза во время работы из рук. Цинковое покрытие рассекателя предохраняет его от коррозии, что особенно актуально для работы в сырых и влажных помещениях.

Эксплуатационные характеристики:

• толщина прокалываемого соединения – 1 мм;
• размер – 250 мм;
• нетто-вес – 800 г;
• покрытие – цинковое;
• пуансон – инструментальная сталь У8;
• рычаги – эргономические;
• функциональность – одной рукой;
• продуцент – Россия, Китай.

Форма прошивочника Зубр позволяет осуществлять монтаж в труднодоступных местах

Отличительными особенностями заклепочника являются его высокая износоустойчивость, продолжительный срок службы, повышенная надежность. Специальная форма скобы для монтажа в труднодоступных потолочных местах только дополняет положительные качества прошивочника.

Просекатель для профиля своими руками

Одноразовые домашние работы, связанные с укреплением стоечных или направляющих реек, можно проводить некоторыми видами клещей, предварительно видоизмененных в форму прорезывателя. Последний как и клещи оснащен ручками-рычагами, режущей кромкой, пружиной и поворотным механизмом. Для превращения их в прошиватель оцинкованных конструкций или тонкостенных листов нужно установить на одной губе втулку, в другой – пуансон из инструментальной стали.

Конечно, самодельный рассекатель будет отличаться от промышленного некоторыми неудобствами, однако и покупать специализированный инструмент для разового применения тоже не стоит.

Устройство просекателя профиля: 1 — скоба, 2 — первая ножка, 3 — вторая ножка, 4 — проем скобы, 5 — основание скобы, 6 — упор, 7 — углубление, 8 — рабочий зазор, 9 — пробойник, 10 — рабочий конец, 11 — неподвижная ручка, 12 — основание неподвижной ручки, 13 — свободный конец неподвижной ручки, 14 — петля, 15 — ограничитель хода петли, 16 — рама, 17 — проем рамы, 18 — подвижная ручка, 19 — кольцо, 20 — свободный конец подвижной ручки, 21 — зацеп, 22 — неподвижная ось, 23 — первая подвижная ось, 24 — вторая подвижная ось, 25 — третья подвижная ось, 26 — соответствующие отверстия, 27 — вторая направляющая прорезь, 28 — коромысло, 29 — первый конечный виток, 30 — второй конечный виток, 31 — скрепляемые детали

Просекатель для металлического профиля под гипсокартон является инновационным рабочим инструментом строителя, мастера по ремонту помещений и домашнего умельца. Перепланировка или утепление стен, простая перегородка или фигурный потолок – все под силу данному прошивочнику. С ним вы позабудете о шурупах, отвертках, а также сбитых пальцах.

Просекатель для металлического профиля под гипсокартон: инструкция, разновидности описание

Очень часто при работе с гипсокартоном приходится собирать каркас из металлического профиля. Большинство имеют представление о том, как должен крепиться гипсокартон, но мало кто догадывается обо всех тонкостях и нюансах крепления профилей между собой. Для этого существуют различные способы, но просекатель для металлического профиля под гипсокартон является наиболее удобным.

Преимущества и недостатки

Просекатели могут иметь саму разную форму в зависимости от производителя

Просекатель представляет собой приспособление для крепления между собой профилей. На его счет у многих неоднозначные взгляды. Большинство сходится на его необходимости, меньшая часть считает такой метод крепления весьма ненадежным. Разберемся в ситуации, показав, какими положительными качествами обладает просекатель для профиля.

1. Экономится время. А ведь действительно, с таким инструментом работа идет значительно быстрее. Использовать заклепки или саморезы по металлу значительно дольше.
2. После использования просекателя на поверхности профиля с лицевой стороны не остается никаких заусениц, вмятин и шероховатостей. В итоге гипсокартон ляжет равномерно на каркас. Если же крепить саморезами, то гипсокартон будет немного оттопыриваться в месте крепления из-за толщины шляпки.
3. Экономия денег на крепеже. Не нужно будет покупать маленькие саморезы по металлу, чтобы скреплять ими направляющие. Для самого инструмента также не нужно ничего дополнительно покупать.
4. Простота в использовании. Работа с инструментом проста и интуитивна. Нужно иметь лишь достаточную силу, чтобы проводить нажим на ручки.
5. Качественный просекатель для гипсокартона создает надежное крепление. Такой узел способен выдержать не только лист гипсокартона, но и куда большие нагрузки.

Сразу хотелось бы остановиться и на негативных моментах. В последнем пункте речь шла о качественном инструменте, но не все они такие. Дешевые просекатели могут делать слабые просечки, которые легко расшатываются, что приводит к ослаблению крепления. Иногда таким грешат и более дорогие просекатели. Поэтому перед выбором инструмента нужно убедиться, что он делает правильные просечки. В этом случае денег жалеть не стоит.

Просекатели, которыми можно выполнять работу одной рукой, дороже двуручных

Не забывайте, что просекатель служит для временной фиксации профилей перед тем, как каркас из них будет обшит гипсокартоном. Некоторые его рассматривают как средство, при помощи которого можно намертво закрепить каркас. Такое мнение ошибочно.

Выбор правильного инструмента

Вопрос о том, какой просекатель лучше для соединения профилей не имеет единого ответа. Однако можно обозначить качества, которыми должен обладать инструмент, чтобы считаться достаточно хорошим для работы. Д и вообще стоит остановить внимание на том, как работает данное приспособление.

Детальное устройство просекателя

Еще 10 лет назад было сложно найти просекатель, которым можно было бы собирать каркас для гипсокартона. Сейчас же таких проблем нет. На самом деле просекателей стало такое множество, что сложно определиться с выбором. Они бывают разных марок, моделей и типов. По своей конструкции они делятся на следующие типы:

• ручной. Наиболее популярная и дешевая разновидность. Такой инструмент имеет форму клещей, которые пробивают дыру в профилях, что и позволяет им держаться вместе. Дорогие модели еще выгибают усики с обратной стороны профиля, делая крепление более надежным. Ручной просекатель для металлического профиля под гипсокартон обычно предназначен для работы обеими руками;
• пневматический. Это профессиональный прибор, который нецелесообразно покупать для одного ремонта. Такой инструмент может создавать за раз сразу несколько отверстий, а для работы с ним требуется минимум усилий;
• станочный. Такие приспособления нужны только в промышленном производстве и работают в автоматическом режиме.

Самая простая модель просекателя не менее качественная, чем дорогие аналоги

У просекателя скоба (ушко) должна быть достаточно большого размера. Это необходимо, чтобы в неё мог зайти профиль и инструмент был достаточно маневренным. Особо это актуально при работе со стоечными и направляющими профилями. Иногда скоба настолько маленькая, что работать комфортно можно только с направляющими, но никак не с потолочным профилем.

При выборе инструмента стоит обратить внимание на усиленные модели. При их изготовлении используются прочные материалы, и просекатель практически не может поломаться во время эксплуатации. Его режущая часть всегда может быть заменена, если затупится.

Производители и бренды

Чтобы подобрать просекатель для профиля гипсокартона, нужно ориентироваться на несколько показателей. Но в конечном итоге начинает казаться, что все они на одно лицо. Даже отфильтровав непригодные инструменты и подобрав ручной просекатель из хорошего металла с большим ушком и эргономической ручкой, остаются вопросы. Под такие критерии всё равно подходит масса инструментов. И тогда начинаешь задумывать о производителе.

Лидируют на рынке компании, которые также занимаются изготовлением гипсокартона и профилей для него. Неудивительно, что многие отдают предпочтение продукции компании «Кнауф». Их модель весьма проста, но в то же время достаточно функциональна. Вся конструкция просекателей Кнауф состоит из неподвижной ручки со скобой, подвижной ручки и пробойника.

Если нужна усиленная модель, то выбирать стоит бренд Stanley. Преимущество таких просекателей в их надежности и возможности работать одной рукой. Но и цена больше, чем у всех конкурентов.

Просекатель Кнауф для любителей, а Stanley – для профессионалов

При желании сэкономить можно выбрать китайский Matrix или отечественный Центринструмент. Цена небольшая, качество соответственное.

Модель компании «КБ Прок» очень удобна и проста в использовании, но применять её можно только при создании перегородок.

Продукция Knipex и EDMULTRAPROFIL изготавливается из толстой стали. Она предназначена для профессионального использования и стоит соответственно.

Существует множество других брендов, продукция которых между собой мало чем отличается. Причем цена на такой инструмент может разниться десятикратно. Если просекатель для металлического профиля под гипсокартон нужен для одного ремонта, то можно взять дешевую модель, с которой будет сложней работать. Если же он будет использоваться часто, то лучше взять дорогой профессиональный инструмент.

Правила работы с инструментом

Порядок работ очень простой и с ним справится даже ребенок, если ему хватит сил. Для еще большей доступности сделаем инструкцию по использованию пошаговой.

1. Выставляются профиля в положение, в котором их необходимо закрепить.
2. Ручки просекателя разводятся в разные стороны, а рабочий крюк заводится между профилей к месту крепления.
3. Одной или двумя руками (зависит от модели) ручки сводятся вместе резким движением. Должен прозвучать щелчок.
4. Ручки разводятся в разные стороны, и просекатель вынимается из профилей.

Получившаяся просечка может иметь разную форму, которая зависит от модели просекателя

Желательно каждое соединение профилей крепить двумя просечками, так надежней. Во время работы нельзя дергать инструмент в разные стороны. Он должен быть в одном положении во время скрепления направляющих. Во время работы центр пуансона должен быть размещен под прямым углом к профилям, что скрепляются.

На модели должен быть указан максимальный размер толщины профиля, с которым она может работать.

К профессиональным просекателям для металлического профиля под гипсокартон выдвигается еще ряд требований относительно того, как за ними нужно ухаживать. Однако для домашнего ремонта своими руками всё это не актуально.

Тендер 161636873: Профиль ПН-4 (75*40) 0,6 L=3м (Гипсокартон и комплектующие), Профиль стоечный Knauf 75х50 мм 3 м 0.60 мм (Гипсокартон и комплектующие), Профиль ПС-4 (75*50) 0,6 L=3м (Гипсокартон и комплектующие), Саморезы ГМ 25×3.5 мм (16000 шт.) (Метизы), Лента уплотнительная 3х70 мм 30 м самоклеющаяся (Метизы и расходники), Саморезы ГД 25×3.8 (3.5) мм (1000 шт.) (Метизы), Дюбель-гвоздь Hard-Fix/Wenzo 6×40 мм цилиндрическая манжета нейлон (150 шт.) (Метизы), Бур SDS-plus Bosch 5X (02608833777) 6х50х110 мм (Расходные материалы для инструмента (буры, биты, диски)), Ножницы по металлу Stanley 250 мм прямые (2-14-563) (Инструмент ручной), Саморезы клопы 16×4.2 мм с буром (1000 шт.) (Метизы), Бита Jettools (W2-11-0252) Ph3 магнитная 25 мм (10 шт.) (Расходные материалы для инструмента (буры, биты, диски)), Просекатель для металлических профилей 330 мм усиленный (Инструмент ручной), Перчатки 4 нити с ПВХ покрытием (СИЗ), Рулетка с фиксатором 5 м x 19 мм (Ручной измерительный инструмент), Уровень магнитный Matrix 80 см 3 глазка (Ручной измерительный инструмент), Ножовка по дереву 400 мм (Инструмент ручной), Комплект спального места с бельем (Спецодежда), Дрель-шуруповерт аккумуляторная Makita DF457DWE 18В 2х1,5Ач Li-Ion (Электробензоинструмент), Шуруповерт безударный Makita FS4000 570 Вт (Электробензоинструмент), Жидкие гвозди Tytan Classic Fix прозрачный 310 мл (Клеи), Гипсокартон ВОЛМА 2500х1200х12.

5 мм влагостойкий (Гипсокартон и комплектующие) (номер заявки: 11152705) —

Описание тендера:

Профиль ПН-4 (75*40) 0,6 L=3м (Гипсокартон и комплектующие), Профиль стоечный Knauf 75х50 мм 3 м 0.60 мм (Гипсокартон и комплектующие), Профиль ПС-4 (75*50) 0,6 L=3м (Гипсокартон и комплектующие), Саморезы ГМ 25×3.5 мм (16000 шт.) (Метизы), Лента уплотнительная 3х70 мм 30 м самоклеющаяся (Метизы и расходники), Саморезы ГД 25×3.8 (3.5) мм (1000 шт.) (Метизы), Дюбель-гвоздь Hard-Fix/Wenzo 6×40 мм цилиндрическая манжета нейлон (150 шт.) (Метизы), Бур SDS-plus Bosch 5X (02608833777) 6х50х110 мм (Расходные материалы для инструмента (буры, биты, диски)), Ножницы по металлу Stanley 250 мм прямые (2-14-563) (Инструмент ручной), Саморезы клопы 16×4.2 мм с буром (1000 шт.) (Метизы), Бита Jettools (W2-11-0252) Ph3 магнитная 25 мм (10 шт.) (Расходные материалы для инструмента (буры, биты, диски)), Просекатель для металлических профилей 330 мм усиленный (Инструмент ручной), Перчатки 4 нити с ПВХ покрытием (СИЗ), Рулетка с фиксатором 5 м x 19 мм (Ручной измерительный инструмент), Уровень магнитный Matrix 80 см 3 глазка (Ручной измерительный инструмент), Ножовка по дереву 400 мм (Инструмент ручной), Комплект спального места с бельем (Спецодежда), Дрель-шуруповерт аккумуляторная Makita DF457DWE 18В 2х1,5Ач Li-Ion (Электробензоинструмент), Шуруповерт безударный Makita FS4000 570 Вт (Электробензоинструмент), Жидкие гвозди Tytan Classic Fix прозрачный 310 мл (Клеи), Гипсокартон ВОЛМА 2500х1200х12. 5 мм влагостойкий (Гипсокартон и комплектующие) (номер заявки: 11152705)

Просекатель для металлического профиля под гипсокартон

Основу гипсокартонных перегородок и потолков составляет каркас из металлических профилей. Для его монтажа долгое время подбирались саморезы. Современные мастера выбирают более надежный способ крепления – просекатель.

Оглавление:

1. Область использования просекателя
2. Главные преимущества
3. Модификации
4. Рекомендации по выбору
5. Средние цены
6. Обзор популярных моделей

Назначение и способ применения

Инструмент используют при соединении (прошивке) листов ГКЛ с рейками металлопрофиля. Его работу можно сравнить с канцелярским дыроколом или степлером. Функциональная часть изготавливается из высокопрочной стали, рукоятка покрыта резиной.

Механизм по своему действию и внешнему виду напоминает клещи или трубный рычажный ключ, которые применяют при монтаже оборудования. Рабочие поверхности исполнены в форме своеобразных губок. Одна служит упором, в котором есть углубление под диаметр режущего элемента. На другой закрепляется пробойник.

Нужно выполнить такие действия:

• Сложить 2 металлопрофиля.
• Максимально развести рукоятки.
• Расположить место крепления между губками просекателя.
• Резко сжать ручки вместе так, чтобы получилась просечка.
• Развести рукоятки в стороны и отвести инструмент.

В результате этих действий на гранях образуется борозда, прочно соединяющая металлические полосы между собой.

Преимущества использования

• Экономичность – применение просекателя для металлического профиля под гипсокартон снижает строительные расходы по монтажу, так как крепеж производится без метизов (саморезов).
• Высокая скорость работ.
• Отсутствие деформаций – гипсокартонный лист не испытывает давления, на нем не образуются многочисленные отверстия как после метизов.
• Плотное соединение – из-за выступающей головки шурупа ГКЛ прилегает к металлопрофилю не очень плотно. Использование просекателя лишено этого недостатка.
• Безопасность – не требует электропитания, от него не тянутся по полу провода, представляющие угрозу для жизни монтажников.

Виды

Просекатель для соединения профилей выпускают в трех модификациях:

• Ручной – с ограниченными крепежными возможностями. Изготавливается из легких и прочных сплавов, обладает компактными размерами. Благодаря низкой цене имеет большую популярность среди мастеров-самоучек.
• Усиленный – функциональный прошиватель со съемными элементами. Предназначен для работы со сложными металлическими профилями.
• Профессиональный – конструкция устройства предусматривает комплект сменных пробойников и губок. Инструмент отличается многофункциональностью и длительным сроком эксплуатации. По сравнению с предыдущими аналогами имеет большие габаритные размеры и вес.

Советы по выбору просекателя

Многие люди считают, что традиционные шуруповерт и саморезы привычнее и надежней. Это ошибочное мнение, так как правильно подобранный пробойник помогает сэкономить силы и время.

Хороший инструмент лучше приобрести в строительном супермаркете или в специализированных магазинах. Просекатель для монтажа металлопрофиля под гипсокартон встречается и на рынке, но там большая вероятность купить подделку.

При выборе исходят не только от цены, но и целевого назначения, объема, вида и частоты выполняемых работ.

• Ручной тип целесообразно приобрести для применения в домашних условиях. Им удобно пользоваться, когда требуется несложный ремонт без привлечения специалистов.
• Бригаде лучше купить усиленный просекатель, предназначенный для металла толщиной до 1,5 мм. Кроме скрепления элементов каркаса можно гнуть, формовать или подрезать уголки металлопрофиля. Инструмент удобен, долговечен и редко ломается.
• Высокая стоимость оправдывается только при постоянной эксплуатации. Поэтому его обычно приобретают компании, занимающиеся капитальным строительством и реализацией масштабных проектов.

Чтобы иметь возможность соединять металлопрофиль разных габаритов (например, ПН 27 и ПП 60), необходимо выбирать модели с большим окошком в рабочей части.

Лучше купить вариант, с которым удобно управляться одной рукой. Второй в это время удерживают стойку в нужном положении. Такой инструмент особенно пригодится при монтаже потолка из ГКЛ.

Расценки

Название	Цена, рубли
Matrix 87951	1100-1320
Sparta	450-840
Knipex	7600-10100
FIT 15007	1090-1400
DEXX	340-750
Hardy	1200-1800
Topex 43E100	1800-1900
Зубр Эксперт 3135	850-980
Santool 032240-001	640-1000
Stanley 1-69-100	9000-12000

Обзор популярных марок

1. Knauf.

Просекатели немецкого производителя пользуются популярностью благодаря несложному устройству и приемлемой цене, с ними легко справится даже новичок. Достоинства:

• Выдержанный баланс цены и качества.
• Безопасность работы.
• Простота и надежность применения.
• В товарной линейке есть модели для профессионалов и любителей.

Примером наиболее простого ручного инструмента является прошиватель Штанцанге. Он состоит из 3-х основных частей:

• Губчатая скоба, прочно соединенная со статичной ручкой.
• Подвижная рукоять с передаточным устройством.
• Пробойник.

Имеется петля, которая служит для фиксации просекателя в сведенном положении.

Позволяет удерживать листы ГКЛ в вертикальном положении во время монтажа стенных перегородок. Используют в качестве отвеса при закреплении металлопрофиля на потолке. Предусмотрена возможность подвешивания сумки с инструментами, шуруповерта и различных приспособлений.

2. Matrix.

Просекатели китайского производителя отлично помогают при установке направляющих реек (потолочных или стоечных), управляются одной рукой. Отверстие просечки отличается чистой гладкой поверхностью с двумя отогнутыми лепестками. На деталях не остается вмятин.

Применяется для подрезания, изгиба и формирования углов металлопрофиля. Эргономичная форма и резиновое покрытие рычагов обеспечивают комфорт пользования. Matrix характеризуется высокой эффективностью, долговечностью и устойчивостью к химической агрессии.

3. Topex.

Польский бренд предназначен для использования в домашних условиях. Просекатель 350 мм Topex 43E100 служит для соединения металлических профилей без применения крепежа. Это существенно снижает расходы на монтаж ГКЛ конструкций и экономит время мастера. Прорезиненные антискользящие рукоятки улучшают комфорт и делают работу безопасной.

4. FIT.

Инструмент китайского производства удачно совмещает в себе надежность, качество и демократичную цену. FIT 15007 специально разработан для ускоренного крепления металлопрофилей одной рукой. Его масса – чуть более 500 г, изготавливается из усиленной стали. Для повышенного комфорта оснащается мягкими прорезиненными рукоятками.

5. Hardy.

Изделие польского бренда служит для ручного скрепления деталей металлического каркаса при монтаже ГКЛ. Изготавливается из стойкой инструментальной стали. Также подходит для отгиба и формирования уголков. Толщина пробиваемого металла – до 1 мм.

6. STANLEY.

За долгие годы существования американский производитель получил заслуженную славу и множество положительных отзывов от мастеров-любителей и профессиональных строителей. Усиленная модель используется для соединения стоечных и направляющих профилей U-образного вида.

Памела Стэнли Ph. D. — Научные интересы | Кафедра клеточной биологии

Профессор кафедры клеточной биологии Председатель Фонда Горация В. Голдсмита Chanin Bldg., Комната 516 718.430.3346 [email protected] На главную Научный интерес Biosketch Последние публикации Участники лаборатории Присоединяйтесь к лаборатории Жизнь в Эйнштейне

Функции гликанов в развитии, передаче сигналов Notch и сперматогенезе Гликозилирование является наиболее распространенной и разнообразной посттрансляционной модификацией белков и является критическим фактором в регуляции их биологических функций.Набор гликанов, который может вырабатываться организмом, называется ГЛИКОМ. Изменения гликанов, экспрессируемых на поверхности клетки, происходят во время развития и дифференцировки. Специфические гликаны на рецепторах Notch модулируют передачу сигнала лигандами Notch. Это новая парадигма передачи сигнала, согласно которой перенос одного остатка сахара изменяет способность рецепторов Notch передавать сигналы. Мы используем мутанты гликозилирования на основе клеток, тесты передачи сигналов Notch, мышей с нокаутом гликозилтрансферазы и биохимические подходы, включая масс-спектрометрию MALDI-TOF, для определения биологических функций рецептора фактора роста и гликанов Notch, а также основных механизмов, с помощью которых гликаны опосредуют биологические события. . Notch рецепторы охватывают клеточную мембрану. Когда лиганд Notch, такой как Delta или Jagged, на аппозирующей клетке связывается с рецептором Notch, он вызывает расщепление внеклеточного домена Notch с последующим вторым расщеплением, которое высвобождает внутриклеточный домен Notch. Внутриклеточный домен Notch переходит в ядро ​​и активирует гены-мишени, которые в конечном итоге приводят к изменению клеточной судьбы или контроля роста клеток. Используя мутант гликозилирования CHO, который добавляет несколько гликанов O-фукозы к внеклеточному домену Notch, мы показали, что передача сигналов Notch заметно снижается, когда фукоза ограничивает. Используя панель различных мутантов гликозилирования СНО, разработанную в этой лаборатории, мы показали, что ингибирование передачи сигналов Notch с помощью гликозилтрансферазы Fringe требует добавления остатка Gal к O-фукозным гликанам на Notch. Мы продолжаем использовать тесты передачи сигналов Notch для определения механизмов действия Fringe и других гликозилтрансфераз, которые модулируют передачу сигналов Notch. Мы также нацелены на гены гликозилтрансфераз, которые кодируют ферменты, которые модифицируют Notch у мышей, и генерируют мутанты Notch, которые не могут принимать O-фукозный гликан в конкретном сайте Notch.У мышей, лишенных O-фукозы в лиганд-связывающем домене, наблюдается дефект развития Т-клеток, и их исследуют на предмет других иммунологических дефектов. Мыши, лишенные трех видов активности Fringe, страдают от развития Т- и В-клеток. Самой последней модификацией Notch является O-GlcNAc, и сейчас мы изучаем его функции в регуляции передачи сигналов Notch у млекопитающих. Мы также исследуем новый ингибитор синтеза сложных N-гликанов, названный GnT1IP-L. Он экспрессируется в основном в половых клетках семенников и строго регулируется во время сперматогенеза.Экспрессия этого гена заставляет клетки прочно связываться с клетками Сертоли, и мы прогнозируем, что это будет важно для взаимодействий между зародышевыми клетками и клетками Сертоли, необходимых для сперматогенеза. Мы проверяем эту гипотезу путем условного удаления ингибитора в сперматогониях, а также путем нокаута целого тела. Мы обнаружили, что сложные N-гликаны необходимы для мужской фертильности, и проверяем гипотезу о том, что они играют важную роль во взаимодействиях сперматид / клеток Сертоли. Наконец, мутанты гликозилирования клеток яичника китайского хомячка (СНО), разработанные в этой лаборатории, продолжают использоваться в качестве хозяев для характеристики орфанных гликозилтрансфераз, идентифицированных в базах данных генома.Геном кодирует около 200 генов гликозилтрансфераз, многие из которых сохранены в результате эволюции, и реакции, которые они катализируют, неизвестны для значительной подгруппы сирот. Мутанты CHO также использовались для разработки новых методов, таких как новый подход к отслеживанию эпитопов гликанов на поверхности клетки. Полный список публикаций здесь >>

Пограничная модуляция Jagged1-индуцированной передачи сигналов Notch требует действия β4галактозилтрансферазы-1

Abstract

Fringe модулирует передачу сигналов Notch, приводя к установлению границ компартментов в развивающихся организмах.Fringe представляет собой β3 N -ацетилглюкозаминилтрансферазу (β3GlcNAcT), которая переносит GlcNAc на O -фукозу в повторах Notch, подобных эпидермальному фактору роста. Здесь мы используем пять различных мутантов гликозилирования клеток яичника китайского хомячка, чтобы определить ключевой аспект механизма действия бахромы. Хотя показано, что активность β3GlcNAcT маниакальной или сумасшедшей бахромы необходима для ингибирования Jagged1-индуцированной передачи сигналов Notch в анализе сокультивирования, этого недостаточно. Fringe не в состоянии ингибировать передачу сигналов Notch, если дисахарид, генерируемый действием бахромы, GlcNAcβ3Fuc, не является удлиненным.Трисахарид, Galβ4GlcNAcβ3Fuc, представляет собой минимальный фукозный гликан O- для поддержки бахромчатой ​​модуляции передачи сигналов Notch. Из шести β4галактозилтрансфераз (β4GalT) в клетках яичников китайского хомячка только β4GalT-1 требуется для добавления Gal к GlcNAcβ3Fuc, идентифицируя β4GalT-1 как новый модулятор передачи сигналов Notch.

Notch рецепторы представляют собой трансмембранные гликопротеины, которые играют ключевую роль в принятии решений о судьбе клеток и контроле роста (1). Для передачи сигнала Notch требуется связывание с лигандом на соседних клетках, которое индуцирует протеолитическое расщепление внеклеточного домена Notch (NECD) с последующим расщеплением γ-секретазой, которое высвобождает внутриклеточный домен Notch (NICD) в цитозоль.Транслокация комплекса NICD в ядро ​​вызывает измененную экспрессию множества генов-мишеней. Fringe представляет собой β3 N -ацетилглюкозаминилтрансферазу (β3GlcNAcT), которая добавляет GlcNAc к O -фукозе на определенных повторах эпидермального фактора роста (EGF) NECD (2–4). У Drosophila бахрома позиционирует передачу сигналов Notch на дорсальной / вентральной границе имагинального диска крыльев в результате его способности ингибировать индуцированную Serrate и потенцировать индуцированную Delta передачу сигналов Notch (5, 6).В раннем оогенезе и в развитии ног и глаз бахрома также способствует активации Notch (7, 8). Анализ мутаций показал, что гликозилтрансферазная активность fringe существенна для его эффекта на передачу сигналов Notch у Drosophila (2-4).

Как и большинство гликозилтрансфераз, бахрома функционирует в Гольджи (3, 4, 9), хотя она также секретируется. Маниакальные (Mfng) и сумасшедшие (Lfng) бахромы млекопитающих, экспрессируемые в разных культивируемых клетках, модулируют Jagged (Serrate) — и Delta-индуцированную передачу сигналов Notch способом, совместимым с функциями бахромы у Drosophila (2, 9-11). В клетках яичника китайского хомячка (СНО), экспрессирующих Mfng или Lfng, Jagged1-индуцированная передача сигналов с помощью эндогенного Notch ингибируется (2, 11). Структурные исследования гликанов O -фукозы, высвобождаемых из NECD, показали, что бахромчатое действие генерирует дисахарид (GlcNAcβ3Fuc), трисахарид (Galβ4GlcNAcβ3Fuc) и тетрасахарид (SAα3Galβ4GlcNAcβ3Fuc) на Notch. Казалось вероятным, что либо зрелый тетрасахарид фукозы O- был необходим для эффекта бахромы, либо GlcNAc, добавленный бахромой, был достаточен для эффекта бахромы из-за маскировки эпитопа фукозы O- , важного для передачи сигналов Notch.Здесь мы используем мутанты гликозилирования СНО, дефектные по добавлению Gal или сиаловой кислоты (SA), чтобы показать, что, вопреки ожиданиям, минимум O -фукозный гликан, который проявляет бахромчатый эффект, представляет собой трисахарид Galβ4GlcNAcβ3Fuc. Т.о., хотя активность fringe β3GlcNAcT необходима, она недостаточна для того, чтобы fringe ингибировал Jagged1-индуцированную передачу сигналов Notch. Из шести β4GalT млекопитающих, которые переносят Gal на GlcNAc в клетках CHO (12), только β4галактозилтрансфераза-1 (β4GalT-1) требовалась для удлинения краевого дисахарида GlcNAcβ3Fuc, что указывает на β4GalT-1 как новый модулятор передачи сигналов Notch.

Материалы и методы

Конструкций.

Описаны конструкции pMirb / MfngAP, pMirb / LfngAP, IgTag / Mfng-Fc, IgTag / Lfng-Fc и CBF1-люцифераза JH-26 с сайтами связывания фактора связывания промотора 8 C (CBF1) (2, 9). pSVL / SGT кодирует короткую форму бычьего β4GalT-1 (13), а pMirb / GDP-4,6-дегидратаза (GDP-4,6-DH; ссылка 14) была получена с помощью ПЦР-амплификации человеческого GDP-4, КДНК 6-DH клонирована в векторе pMT21. Праймеры представляли собой 5′-CGCGAATTCCCGCCGCGGGACATGGC-3 ‘и 5′-CGCGGATCCGCTGCTCAGGCATTGGG-3’, расщепленные с помощью Eco RI / Bam HI и лигированные в pMirb.

Клетки и трансфекция.

Lec1. 3C (15), Lec2.6A (16), Lec8.3D (17), Lec13.6A (14, 18) и Lec20.15C (12) мутанты гликозилирования CHO, полученные из Pro ^— 5 клеток CHO были охарактеризованы. Они обозначаются как Lec1, Lec2, Lec8, Lec13 и Lec20 соответственно. Клетки СНО стабильно трансфицировали 1-2 мкг плазмидной ДНК с использованием Fugene 6 (Roche Diagnostics) и отбирали в 1,5 мг / мл активного G418 (Gemini Biological Products, Калабасас, Калифорния).Активность среды в отношении щелочной фосфатазы (ЩФ) была проанализирована для выявления высокоэкспрессоров химерного белка fng.AP (2). L-клетки, стабильно экспрессирующие Jagged1 (клетки J1; ссылка 19), и L-клетки сортировали с использованием козьих антител против крысиного Jagged1 ECD Ab (R&D Systems) для получения клеток J1, экспрессирующих высокие уровни J1 и L-клеток, экспрессирующих минимальное количество J1. Клетки СНО эндогенно экспрессируют Notch2 (20) и Notch3 (11) и имеют низкий уровень транскриптов для радикальной бахромы (Rfng) и Lfng (11). Мы подтвердили, что Rfng и Lfng экспрессировались в наших клетках CHO с помощью обратной транскрипции (RT) -PCR с использованием вырожденных праймеров, основанных на человеческих и мышиных бахромных последовательностях (см. Supporting Information , которая опубликована на веб-сайте PNAS, www.pnas.org). Транскрипты Mfng не были обнаружены с помощью ОТ-ПЦР (см. вспомогательная информация ) или северного анализа (11). Вестерн-блоттинг с бахромчатым Abs (Santa Cruz Biotechnology) не выявил специфических сигналов, но структурный анализ выявил O -тетрасахарид фукозы (20), что соответствует низкому уровню эндогенной бахромчатой ​​активности в клетках CHO.

Структурная характеристика

O -фукозных гликанов.

Клетки временно трансфицировали 5 мкг фрагментов ECD pSectag2C / Hygro мыши Notch2 EGF19–23 (2) или EGF1–36 с помощью GenePORTER (Gene Therapy Systems, Сан-Диего) и метили в течение 24–48 часов 20 мкКи 5, 6- ³ Hl-фукоза (60 Ки / ммоль; American Radiolabeled Chemicals, St.Луи). Секретированный Notch2 EGF19–23 очищали с использованием гранул Ni ²⁺ -агарозы (Qiagen, Chatsworth, CA). Секретированный Notch2 EGF1–36 очищали с использованием хелатирующей колонки HiTrap (Amersham Pharmacia), заполненной Ni ²⁺ . Были описаны [ ³ H] мечение фукозы, расщепление PNGase F, β-элиминирование O- гликанов и анализ O -гликанов фукозы с помощью гель-фильтрационной хроматографии и анионообменной хроматографии с высоким pH (20). Стандарты фукозы O- были получены из Lec1 ³ H-меченный O -тетрасахарид фукозы (SAα3Galβ4GlcNAcβ3Fucitol), расщепленный нейраминидазой I (Glyko, Novato, Калифорния), с получением трисахарида фукозы O- и β3Glβ4Glβ4β4 -галактозидаза ( Diplococcus pneumoniae , Roche Molecular Biochemicals) для образования дисахарида (GlcNAcβ3Fucitol), как описано (20).Моносахарид (МС) — это фукитол, восстановленная форма фукозы.

Сайт-направленный мутагенез.

Мутация LfngDDA была сделана в pCS2 + / Lfng путем замены кодона 201 мышиного Lfng (21) на 5′-GGTTCTGCCACGTGGATGATGCCAACTACGTCAACC-3 ‘и 5′-GGTTGACGTAGTAGTTGGCATCATCCACAACTACGTCAACC-3′ и 5’-GGTTGACGACGTAGTTGGCATCATCCACAACTGACCG с использованием праймеров, направленных на сайт (Staggen-3), в качестве мутантных праймеров -3Cagent-3 (Staggen-3). ORF LfngDDA затем амплифицировали с праймерами 5′-CCCAAGCTTGCCGCCGCCACCATGCTCC-3 ‘и 5′-GGAAGATCTGAAGATGGCGGAGCGAGG-3’, расщепляли с помощью Hin dIII / Bgl II и клонировали в вектор IgTag.Мутация MfngDDA была сделана непосредственно на pMirb / MfngAP путем замены кодона 144 мышиного Mfng (21) на 5′-GGTTCTGCCACGTGGATGATGCCAACTATGTGAACCC-3 ‘и 5′-GGGTTCACATAGTTGGCATCATCACGTGGCAGA как праймеры. ORF MfngDDA была амплифицирована из pMirb / MfngAP.DDA с 5’-CCCAAGCTTGGGGGCCTGCTACCAATGC-3 ‘и 5′-GGAAGATCTGGGGCGCTGCCAGCAGCGG-3’ в качестве праймеров, расщепленных с помощью вектора Hin 900gl46 dIII / B Все мутировавшие сайты были подтверждены прямым секвенированием.

Связывание с гороховым лектином.

Клетки Lec13 временно трансфицировали pMirb / GDP-4,6-DH с использованием Fugene 6. Через 30 часов клетки фиксировали 4% формальдегидом и блокировали 5% BSA в PBS / 1 мМ CaCl ₂ /1 мМ MgCl ₂ /1 мМ MnCl ₂ . Через 30 мин при комнатной температуре добавляли 25 мкг / мл меченного FITC лектина гороха (Vector Laboratories) на 1 час при комнатной температуре. После промывки PBS без катионов клетки фотографировали.

Приготовление теста с растворимой кромкой и гликозилтрансферазой.

Клетки

HEK-293T трансфицировали 1 мкг ДНК в 3 мкл Fugene 6. Через 24 ч среду заменяли 2 мл Opti-mem (GIBCO), 1% FBS, антибиотиками и 0,1 мг / мл CaCl. ₂ . Среду собирали через 48 часов и добавляли полные ингибиторы протеазы, не содержащие Mini EDTA (CPI-EDTA; Roche Biochemicals). Супернатант перед концентрированием осветляли с помощью вращающегося устройства (отсечка 30 кДа, Millipore). Добавляли гранулы протеина A / G-сефарозы (30 мкл; Santa Cruz Biotechnology).После 12-часового вращения при 4 ° C шарики были промыты, как описано (2). Чистоту и концентрацию связанных fng.Fc определяли денситометрическим анализом гелей SDS / PAGE, окрашенных кумасси синим, по сравнению со стандартом BSA. Анализ GlcNAc-трансферазы выполняли, как описано (2), с использованием 10 мМ Fuc- O- pNp в качестве субстрата.

Анализ сигналов Notch.

Анализ передачи сигналов Notch для сокультуры выполняли, как описано (2). Клетки СНО в 6-луночном планшете котрансфицировали 200 нг CBF1-люциферазной плазмиды JH-26, 100 нг люциферазы pRL-TK Renilla (Promega) и 1.5 мкг вектора pMirb с использованием Fugene 6. Через 16 ч при 37 ° C накладывались 2 × 10 ⁶ J1 или родительских L-клеток. Еще через 32 часа измеряли активность люциферазы и люциферазы Renilla в лизатах (Promega). Все эксперименты проводились дважды и в двух экземплярах. Фоновые уровни люциферазы для клеток СНО составляли ≈1, сокультура люциферазных единиц J1 варьировала от ≈100 до 1400 (в среднем ≈200), а Renilla единиц люциферазы варьировала от ≈800 до 8000 (в среднем ≈2500).Jagged1-зависимая активация Notch CBF1-люциферазы выражается как отношение нормализованных единиц люциферазы в сокультурах J1 и L.

Анализ FACS.

Клетки

(2 × 10 ⁵ ) промывали 4 мл холодного 2% БСА в сбалансированном солевом растворе Хэнкса (HBSS; Ca ²⁺ — и Mg ²⁺ -free; Mediatech, Herndon, VA). и ресуспендировали с 200 мкл 2% BSA в HBSS, содержащем либо 2,5 мкг кроличьих антител против NECD (h231, Santa Cruz Biotechnology), либо 2.5 мкг нормального кроличьего IgG (Sigma). После инкубации при 4 ° C с осторожным покачиванием в течение 45 мин клетки промывали 4 мл холодного 2% BSA в HBSS, ресуспендировали в 200 мкл 2% BSA в HBSS, содержащем 1 мкг FITC-меченного козьего антикроличьего IgG ( H + L) (Zymed) и инкубировали при 4 ° C в течение 45 мин. После промывания 4 мл холодного 2% BSA в HBSS клетки ресуспендировали с 500 мкл HBSS и подвергали анализу FACS.

Результаты

Активность Fringe β3GlcNAcT необходима для модуляции сигнала Notch, индуцированного Jagged1.

Эндогенная передача сигналов Notch в клетках CHO индуцируется в 4-6 раз при совместном культивировании с клетками, экспрессирующими Jagged1 (2, 9, 11). Клетки СНО, экспрессирующие Mfng или Lfng, имеют пониженный ответ на Jagged1 в анализе сокультивирования (2, 11). Чтобы показать, что этот эффект требует активности бахромы β3GlcNAcT, консервативный мотив DDD в аминокислотах 142–144 в Mfng был преобразован в DEE, мутацию, которая, как известно, инактивирует как активность, так и функцию β3GlcNAcT в бахромке Drosophila (2). Однако Mfng.DEE не производился при 37 ° C, хотя он мог быть выражен эквивалентно Mfng.DDD при 32 ° C. Напротив, другая мутация, Mfng.DDA, была стабильной при 37 ° C и экспрессировалась на уровне, аналогичном MfngDDD дикого типа, на основе активности AP в секретах и ​​лизатах. И Mfng.DDA, и Lfng.DDA (по аминокислотам 199-201), меченные на С-конце Fc IgG ₁ , очищали на шариках и анализировали на перенос GlcNAc на Fuc- O- pNp. Хотя белки бахромы дикого типа Mfng.DDD / Fc и Lfng.DDD / Fc обладали активностью β3GlcNAcT, для мутантов бахромы DDA не было обнаружено ничего (таблица 1).Когда клетки СНО, стабильно экспрессирующие Mfng. DDA, тестировали в анализе сокультивирования, не было ингибирования Jagged1-индуцированной передачи сигналов Notch (фиг. 1 A ). Следовательно, активность бахромы β3GlcNAcT важна для бахромы, чтобы модулировать Jagged1-индуцированную передачу сигналов Notch в клетках СНО.

Таблица 1

GlcNAc-трансферазная активность мутантных Mfng и Lfng

Рисунок 1

Бахромчатая активность гликозилтрансферазы и перенос фукозы необходимы для бахромчатой ​​модуляции передачи сигналов Notch.( A ) Гистограмма показывает кратность активации нормализованных единиц люциферазы в контроле (вектор), Mfng дикого типа (Mfng.DDD) и мутантных (Mfng.DDA) трансфектантах CHO и Lec1, стимулированных J1 по сравнению с L-клетками. (J1 / L). Планки погрешностей представляют SEM; n = 4. ( B ) Синтез GDP-фукозы в клетках СНО блокируется в клетках Lec13 в результате сниженной транскрипции гена GDP-4,6-DH . ( C ) Иммунофлуоресценция FITC-лектина гороха на поверхности клеток Lec13, CHO и Lec13, временно трансфицированных pMirb / GDP-4,6-DH. ( D ) Фолд-активация нормализованных единиц люциферазы в СНО, Lec13.Mfng и Lec13.Mfng, временно трансфицированных pMirb / GDP-4,6-DH. Планки погрешностей представляют SEM; n = 4 для каждого.

O -фукоза, которая переносится с GDP-фукозы на остатки серина / треонина в EGF-повторах NECD, является субстратом бахромы (2). Клетки Lec13 CHO имеют низкие уровни GDP-фукозы из-за мутации, которая по существу отменяет экспрессию гена GDP-4,6-DH (рис.1 B ; ссылки 14 и 18). Коррекция клеток Lec13 путем трансфекции с помощью кДНК, кодирующей GDP-4,6-DH, восстанавливала фукозу на гликопротеинах клеточной поверхности, как показано по восстановлению их способности связывать лектин гороха (фиг. 1 C ). Jagged1-индуцированная передача сигналов Notch также восстанавливалась до уровней дикого типа, как и модуляция передачи сигналов Notch с помощью бахромы (Fig. 1 D ). Спасение было более полным, чем было получено ранее при добавлении к среде экзогенной фукозы (2). Следовательно, Jagged1-индуцированная передача сигналов Notch усиливается присутствием O -фукозы, и активность фукозы и бахромы β3GlcNAcT важна для бахромы, чтобы модулировать передачу сигналов Notch.

Действие по краю необходимо, но его недостаточно для подавления передачи сигналов метки, вызванной зазубринами 1.

Клетки

Lec1 CHO имеют дефектный синтез N -гликанов, но нормальный синтез O -гликанов (22, 23). Они отвечают на стимуляцию Jagged1 и обнаруживают ингибирование передачи сигналов Notch с помощью Mfng аналогично родительским клеткам СНО (2). O -фукозные гликаны, высвобождаемые из мышиного Notch2-фрагмента EGF19–23, секретируемого из клеток Lec1 CHO, показывают, что Mfng вызывает удлинение доли O -фукозы MS к тетрасахариду, SAα3Galβ4GlcNAcβ3Fuc (2).Следовательно, тетрасахаридные или ди- или трисахаридные промежуточные соединения могут быть ответственны за модуляцию передачи сигналов Notch с помощью бахромы.

Мутанты гликозилирования Lec2 CHO имеют мутации в транспортере CMP-SA, которые предотвращают транслокацию CMP-SA в Golgi, заметно ингибируя сиалирование гликопротеинов (16). Notch2 EGF19–23, секретируемый клетками Lec2, экспрессирующими Lfng (Lec2.Lfng), содержал фукозные гликаны MS и трисахарид O- (фиг. 2 A ). Тетрасахарид не был обнаружен, как и ожидалось, если CMP-SA не был доступен.Секретируемый фрагмент Notch2, содержащий все субстраты повторов EGF бахромы (EGF1–36), также не содержал тетрасахарида при экспрессии в клетках Lec2.Mfng (см. Supporting Information ). В отсутствие Lfng (Lec2.vector) фукоза O- не была удлиненной на EGF19–23 (фиг. 2 A ). Когда клетки Lec2.vector анализировали на Jagged1-индуцированную передачу сигналов Notch, они были такими же активными, как клетки CHO или Lec1 (фиг. 2 B ). Кроме того, как Mfng, так и Lfng ингибировали Jagged1-индуцированную передачу сигналов Notch в одинаковой степени у независимых трансфектантов Lec2 (рис.2 В ). Ингибирование передачи сигналов Notch с помощью бахромы не было результатом снижения экспрессии Notch2 на клеточной поверхности в трансфектантах Lec2 (фиг. 2 C ). Т.о., SA не важен ни для Jagged1-индуцированной передачи сигналов Notch, ни для того, чтобы бахрома подавляла передачу сигналов Notch. Однако ингибирование происходит, когда фукоза O- удлиняется до трисахарида, Galβ4GlcNAcβ3Fuc.

Рисунок 2

Галактоза, но не SA требуется для эффекта бахромы. ( A ) Гель-фильтрация [ ³ H] фукозо-меченных O- гликанов, высвобождаемых β-элиминированием из Notch2 EGF19–23, секретируемого из клеток Lec2 или Lec8, экспрессирующих Lfng (темные кружки) или вектор (белые квадраты) .Основным видом (≈1 500 имп / мин) была фукоза O- MS (фукитол). Указаны положения элюирования стандартных O- гликанов фукозы (Tetra, SAα3Galβ4GlcNAcβ3Fucitol; Tri, Galβ4GlcNAcβ3Fucitol; Di, GlcNAcβ3Fucitol; Mono, Fucitol). ( B ) Фолд-активация нормализованных единиц люциферазы в клонах CHO, Lec1, Lec2 или Lec8, экспрессирующих вектор, Mfng или Lfng, стимулированные клетками J1 по сравнению с L. Планки погрешностей представляют SEM; n = 4. ( C ) FACS-анализ с Notch2 ECD Ab.Пунктирная линия — нормальная кроличья сыворотка; пунктирная линия — Lec2.vector или Lec8.vector; сплошная линия, Lec2.Lfng или Lec8.Lfng.

Чтобы определить, является ли концевой остаток Gal на Galβ4GlcNAcβ3Fuc существенным для эффекта бахромы, исследовали мутанты СНО, дефектные по добавлению Gal. Мутанты Lec8 CHO имеют мутации в транспортере UDP-Gal, которые предотвращают транслокацию UDP-Gal в Гольджи и ингибируют галактозилирование гликопротеинов (17). Результаты на фиг.2 B показывают, что, в отличие от мутантов Lec2, мутанты Lec8 CHO, экспрессирующие Mfng или Lfng, были невосприимчивы к эффекту ингибирования бахромы (фиг.2 В ). Хотя Jagged1-индуцированная передача сигналов Notch была сходной в клетках Lec8.vector и Lec2.vector, ни клетки Lec8.Lfng, ни Lec8.Mfng не проявляли ингибирования передачи сигналов Notch. Notch2 на клеточной поверхности экспрессировался на сходных уровнях в клетках Lec8.vector и Lec8.fng (фиг. 2 C ), и анализы AP показали, что белки бахромы экспрессируются эквивалентно. Кроме того, структурный анализ гликанов O -фукозы показал, что бахрома была активна в клетках Lec8.fng (фиг. 2 A ).Характеристика Notch2 EGF1–36, секретируемого из клеток Lec8.Mfng (см. вспомогательная информация ), и Notch2 EGF19–23, секретируемого из Lec8.Lfng (рис. 2 A ), показала, что фукоза O- удлинялась только до дисахарида. в клетках Lec8.fng, тогда как клетки Lec8.vector не удлиняли фукозу O- . Как и ожидалось, клетки Lec8.fng не продуцировали O- трисахарид или тетрасахарид фукозы (фиг. 2 A ). Следовательно, тогда как трисахарид Galβ4GlcNAcβ3Fuc на Notch в Lec2.Клетки fng поддерживают ингибирование Jagged1-индуцированной передачи сигналов Notch, дисахарид GlcNAcβ3Fuc, синтезируемый Mfng или Lfng в клетках Lec8, нет. Чтобы получить эффект бахромы на передачу сигналов Notch, действие β4GalT необходимо после бахромы.

β4GalT-1 требуется для Fringe для модуляции сигнала режекции, индуцированного Jagged1.

Хотя клетки СНО могут экспрессировать все шесть генов β4GalT, которые, как известно, переносят Gal на GlcNAc у млекопитающих (12), наша линия СНО дикого типа, Pro ^— 5, не имеет транскриптов для β4GalT-6 (12).Однако клетки Pro ^— 5Lec1 экспрессируют генерируемые бахромой O- три- и тетрасахариды фукозы (ссылка 2; см. Рис. 5, который опубликован в качестве вспомогательной информации на веб-сайте PNAS), а также демонстрируют ингибирование передачи сигналов Notch. бахромой (поз. 2; рис. 2 B ). Следовательно, β4GalT-6 не является существенным для синтеза три- или тетрасахаридных O -фукозных гликанов. Напротив, клетки Pro ^— 5Lec20 CHO, в которых отсутствуют как β4GalT-6, так и β4GalT-1 (12), не проявляют эффекта бахромы, хотя они хорошо реагируют на Jagged1 (рис.3 А ). Подобно клеткам Lec8, независимые клоны Lec20, экспрессирующие Mfng или Lfng, не снижали передачу сигналов Notch (фиг. 3 A ). Экспрессия Notch2 на клеточной поверхности была эквивалентной в клетках Lec20, экспрессирующих бахрому и вектор, и все клетки Lec20.fng продуцировали такое же количество бахромы, как определено с помощью AP-активности. Структурный анализ [ ³ H] фукозных гликанов O- фукозы на Notch2 EGF1-36, секретируемом из Lec20.Mfng выявил только дисахарид (см. Поддерживающая информация ), что также наблюдалось в EGF19-23, секретируемом из Lec20.Lfng (рис.3 B ). Ни трисахарид фукозы O- , ни тетрасахарид не синтезировались в клетках Lec20.fng. Таким образом, ни β4GalT-2, β4GalT-3, β4GalT-4, ни β4GalT-5, которые экспрессируются в клетках Pro ^— 5Lec20 (12), не способны удлинить дисахарид бахромы, GlcNAcβ3Fuc.

Рисунок 3

Мутант Lec20 β4GalT-1 не проявляет бахромчатого эффекта. ( A ) Фолд-активация нормализованной активности люциферазы в клонах Lec1 и Lec20, стабильно экспрессирующих вектор, Mfng или Lfng, стимулированные J1 vs.L. клетки. Планки погрешностей представляют SEM; n = 4. ( B ) Профили гель-фильтрации [ ³ H] меченных фукозой гликанов O- , высвобождаемых β-элиминированием из Notch2 EGF19–23, произведенного Lec20.Lfng (закрашенные кружки) или Lec20 .vector (открытые квадраты). Указаны положения элюирования стандартных гликанов фукозы O-.

Дополнительное доказательство того, что β4GalT-1 необходим для образования трисахарида O -фукозы, было получено путем исправления дефекта в клетках Lec20 с помощью кДНК, кодирующей β4GalT-1 крупного рогатого скота.Клетки Lec20, стабильно экспрессирующие Lfng, устойчивы к Gal-связывающему лектину E-фитогемагглютинину (PHA), как клетки Lec20.vector и Lec20 (фиг. 4 A ). Трансфекция бычьей кДНК β4GalT-1 почти полностью спасла чувствительность клеток Lec20 к E-PHA. Анализ активности β4GalT в клеточных лизатах с GlcNAc в качестве акцептора показал коррекцию сниженной активности β4GalT в клетках Lec20 (не показано). Структурный анализ [ ³ H] фукозо-меченных гликанов O- , высвобождаемых из Notch2 EGF19–23, показал, что экспрессия бычьего β4GalT-1 в Lec20.fng клетки привели к синтезу тетрасахарида (рис. 4 B ). Коррекция дефекта Lec20 β4GalT-1 также привела к устранению бахромчатого эффекта на передачу сигналов Notch в клетках Lec20. Клон Lec20.Lfng D8, экспрессирующий β4GalT-1, ингибировал передачу сигналов Notch аналогично клеткам Lec2.Lfng (фиг. 4 C ). Коррекция клеток Lec20 CHO с помощью кДНК β4GalT-1 демонстрирует, что этот конкретный β4GalT действует на дисахаридный продукт бахромы и является новым модулятором передачи сигналов Notch.

Рисунок 4

Спасение краевого эффекта с помощью β4GalT-1.( A ) Тест на чувствительность к лектинам. Клетки, выживающие в E-фитогемагглютинине (PHA), окрашивали метиленовым синим. ( B ) Профили гель-фильтрации [ ³ H] меченных фукозой гликанов O- , высвобождаемых β-элиминированием из Notch2 EGF19–23, продуцируемого клетками Lec20, экспрессирующими Lfng и β4GalT-1. Указаны положения элюирования стандартов O -глюкозы-гликана. ( C ) Фолд-активация нормализованных единиц люциферазы в клонах Lec2 или Lec20, экспрессирующих вектор, Lfng или Lfng + GT (β4GalT-1), стимулированная J1 vs.L. клетки. Планки погрешностей представляют SEM; n = 4.

Обсуждение

Открытие того, что в клетках CHO бахрома β3GlcNAcT вызывает не только синтез дисахарида GlcNAcβ3Fuc на NECD, но также три- и тетрасахаридов (2), сразу же вызвало вопрос: достаточно ли действия бахромы, чтобы вызвать модуляцию передачи сигналов Notch? Путем анализа функции бахромы у мутантов гликозилирования СНО, дефектных по добавлению Fuc (Lec13), Gal (Lec8 и Lec20) или SA (Lec2), мы обнаружили, что для ингибирования бахромы индуцированной Jagged1 передачи сигналов Notch необходима фукоза в качестве субстрата для бахромы. и удлинение образованного бахромой дисахарида за счет остатка Gal.Результаты, обобщенные в таблице 2, показывают, что фукоза O- облегчает передачу сигналов Notch с помощью Jagged1 и что Mfng или Lfng ингибирование индуцированной Jagged1 передачи сигналов Notch требует действия не только бахромы, но также β4GalT-1. Минимальный O -глюкозный гликан, который действует, чтобы ингибировать передачу сигналов Notch, представляет собой трисахарид, Galβ4GlcNAcβ3Fuc, самый длинный O -глюкозный гликан, синтезируемый в клетках Lec2 CHO. Эти выводы идентифицируют ключевые аспекты существенных ролей O -fuosis -fu разве гликанов в передаче сигналов Notch.Они также предоставляют важную информацию о побочном механизме действия и фокусируют эксперименты, которые необходимо проводить на организмах.

Таблица 2

O -фукозные гликаны, которые облегчают или модулируют передачу сигналов Notch

β4GalT, связанный с β4GalT-1, может также требоваться для бахромчатой ​​модуляции передачи сигналов Notch у Drosophila . Геном Drosophila кодирует три гена с сильной гомологией с геном β4GalTs. Один из них (CG11780) имеет несколько особенностей, типичных для β4GalT-7, которые добавляют Gal к ксилозе (24).Два других, CG8536 и CG14517, больше похожи на те, которые переносят Gal на GlcNAc (25, 26). Оба кодируют трансмембранный гликопротеин типа II, содержащий четыре консервативных остатка цистеина. Геном Drosophila также содержит по крайней мере один ген, который гомологичен сиалилтрансферазе (CG4871), но, в свете наших открытий, сиалилтрансфераза не обязательна для бахромчатой ​​модуляции передачи сигналов Notch.

Сигнальные пути Notch у млекопитающих значительно сложнее.В то время как Drosophila экспрессируют один Notch и только два лиганда (Serrate и Delta), млекопитающие экспрессируют четыре рецептора Notch, два Jagged / Serrate и три Delta лиганда и три краевых гликозилтрансферазы. Т.о., хотя мыши с нокаутом β4GalT-1 (27, 28) и мыши, лишенные Lfng (29, 30), различаются по общему морфологическому фенотипу, они, как предполагается, обладают общими подмножествами признаков из-за нарушения бахромчатой ​​модуляции передачи сигналов Notch. Однако эти фенотипы трудно выявить, поскольку β4GalT-1 экспрессируется повсеместно и действует на многие гликопротеины, кроме Notch.Кроме того, мутации у мышей и людей обнаруживают различные функции in vivo и практически для всех потенциально избыточных молекул в путях передачи сигналов Notch.

В Drosophila и клетках млекопитающих бахрома в Notch-экспрессирующей клетке изменяет связывание растворимых форм лиганда (3, 11). Следовательно, O -глюкозные гликаны на EGF-повторах Notch играют прямую или косвенную роль в связывании лиганда. Они могут вызывать конформационные изменения в NECD, которые изменяют природу или эффективность связывания лиганда.Наши результаты предсказывают, что дисахарида фукозы O будет недостаточно, чтобы вызвать изменение, тогда как трисахарид фукозы O- является минимальным определяющим фактором, которого будет достаточно. Хотя присутствие фукозы O- MS на EGF-повторе фактора свертывания VII не изменяет конформацию раствора, определенную с помощью ЯМР (31), неизвестно, будут ли удлиненные гликаны фукозы O- влиять на конформацию тандемного EGF. повторяется.

Также возможно, что лиганды Notch связываются непосредственно с гликанами фукозы O- посредством лектин-подобного распознавания.Различные пары Notch-лиганд / рецептор могут образовываться посредством распознавания специфических O- гликанов фукозы, прикрепленных к конкретным повторам EGF, поскольку субстрат бахромы представляет собой правильно свернутый повтор EGF с фукозой O- (2). Фактически, существуют различия между четырьмя гомологами Notch млекопитающих в положениях предсказанных O- сайтов фукозы, хотя многие сайты являются консервативными (20). Альтернативно, лектины на поверхности клетки могут связывать разные O- фукозные гликаны на Notch и тем самым влиять на взаимодействия Notch-лиганд.Например, галектины связывают концевые остатки Gal и могут связывать Gal, кэпированный SA (32). В этом случае тетрасахарид может работать так же эффективно, как трисахарид, при ингибировании Jagged1-индуцированной передачи сигналов Notch, как мы действительно наблюдали. Будущие исследования могут определить фукоз-гликаны O-, необходимые для передачи сигналов различными рецепторами и лигандами Notch, а также механизм, с помощью которого различные фукоз-гликаны O- на различных EGF-повторах NECD индуцируют или модулируют передачу сигналов Notch.

Благодарности

Мы благодарим Субха Сундарама за отличную техническую помощь; Томас Фогт и Стюарт Джонстон за конструкции бахромы; Gerry Weinmaster для клеток J1 L; Joel Shaper для кДНК β4GalT-1; Роберт Халтивангер для стандартов O -фукозы и mNotch2 EGF1–36; Фрэнсис Салливан для кДНК GDP-4,6-дегидратазы; Дайан Хейворд для JH-26, Филипп Шерер для клеток HEK-293T; и Кен Ирвин, Том Фогт, Боб Халтивангер и Филипп Шерер за полезные обсуждения.Эта работа была поддержана грантом Национального института здравоохранения № RO1 36434, Фондом Мизутани (для P.S.) и стипендией Belfer (для D.J.M.). Частичная поддержка была предоставлена ​​онкологическим центром Альберта Эйнштейна, грант PO1 13330.

Сноски

• ↵ * Кому следует обращаться с запросами на перепечатку. Электронная почта: stanley {at} aecom.yu.edu.

• Этот документ был отправлен напрямую (Трек II) в офис PNAS.

Сокращения

EGF,

фактор роста эпидермиса;

NECD,

внеклеточный домен Notch;

CHO,

яичник китайского хомячка;

SA,

сиаловая кислота;

Mfng,

маниакальная бахрома;

Lfng,

безумная бахрома;

4GalT-1,

β4галактозилтрансфераза-1;

AP,

щелочная фосфатаза;

MS,

моносахарид;

ВВП-4.6-DH,

GDP-4,6-дегидратаза;

HBSS,

Сбалансированный солевой раствор Хэнкса

• Авторские права © 2001, Национальная академия наук

Роли гликозилирования в передаче сигналов notch — Медицинский колледж Альберта Эйнштейна

TY — JOUR

T1 — Роли гликозилирование в передаче сигналов notch

AU — Stanley, Pamela

AU — Okajima, Tetsuya

N1 — Информация о финансировании: Авторы хотят поблагодарить своих сотрудников и сотрудников лаборатории за их большой вклад на протяжении многих лет.Эта работа была поддержана грантом Национального института Канера RO1 95022 для P.S. и гранты Министерства образования, науки, спорта и культуры Японии и программы Human Frontier Science для T.O.

PY — 2010

Y1 — 2010

N2 — Notch и лиганды Notch DSL Delta и Serrate / Jagged представляют собой гликопротеины с одним трансмембранным доменом. Внеклеточный домен (ECD) как рецепторов Notch, так и лигандов Notch содержит многочисленные повторы, подобные эпидермальному фактору роста (EGF), которые посттрансляционно модифицируются множеством гликанов.Инактивация подмножества генов, кодирующих гликозилтрансферазы, которые инициируют и удлиняют эти гликаны, ингибирует передачу сигналов Notch. При формировании границ развития у дрозофилы и млекопитающих, в развитии Т-клеток мыши и В-клеток маргинальной зоны и в анализах передачи сигналов Notch при совместном культивировании регуляция передачи сигналов Notch гликанами на сегодняшний день является клеточно-автономным эффектом Notch-экспрессирующая клетка. Регулирование передачи сигналов Notch с помощью гликанов представляет собой новую парадигму передачи сигналов.Гликаны O-фукозы модулируют силу связывания Notch с лигандами Notch DSL, в то время как гликаны O-глюкозы способствуют расщеплению Notch примыканием к мембране, генерируя субстрат для внутримембранного расщепления и активации Notch. Точное определение того, как добавление определенных сахаров в определенных местах Notch изменяет передачу сигналов Notch, является проблемой на будущее.

AB — Notch и лиганды DSL Notch Delta и Serrate / Jagged представляют собой гликопротеины с одним трансмембранным доменом. Внеклеточный домен (ECD) как рецепторов Notch, так и лигандов Notch содержит многочисленные повторы, подобные эпидермальному фактору роста (EGF), которые посттрансляционно модифицируются множеством гликанов.Инактивация подмножества генов, кодирующих гликозилтрансферазы, которые инициируют и удлиняют эти гликаны, ингибирует передачу сигналов Notch. При формировании границ развития у дрозофилы и млекопитающих, в развитии Т-клеток мыши и В-клеток маргинальной зоны и в анализах передачи сигналов Notch при совместном культивировании регуляция передачи сигналов Notch гликанами на сегодняшний день является клеточно-автономным эффектом Notch-экспрессирующая клетка. Регулирование передачи сигналов Notch с помощью гликанов представляет собой новую парадигму передачи сигналов.Гликаны O-фукозы модулируют силу связывания Notch с лигандами Notch DSL, в то время как гликаны O-глюкозы способствуют расщеплению Notch примыканием к мембране, генерируя субстрат для внутримембранного расщепления и активации Notch. Точное определение того, как добавление определенных сахаров в определенных местах Notch изменяет передачу сигналов Notch, является проблемой на будущее.

UR — http://www.scopus.com/inward/record.url?scp=77956331145&partnerID=8YFLogxK

UR — http: //www.scopus.com / inward / citedby.url? scp = 77956331145 & partnerID = 8YFLogxK

U2 — 10.1016 / S0070-2153 (10) 92004-8

DO — 10.1016 / S0070-2153 (10) 92004-8

M3 — Article

C2 — 20816394

AN — SCOPUS: 77956331145

VL — 92

SP — 131

EP — 164

JO — Актуальные темы биологии развития

JF — Текущие темы биологии развития

SN — 0070-2153

IS — C

ER —

Доводчики Stanley A16401H695 Доводчик с параллельным удержанием в открытом положении Распределители Top Notch серии 1600

Коммерческие дверные изделия Доводчики Stanley для бизнеса и промышленности A16401H695 Доводчик с параллельной фиксацией и открытым открыванием Серия 1600 Дистрибьюторы высшего качества montibello.ком

и пользуйтесь. Этот продукт произведен в Японии. 。。 。. Доводчики Stanley A16401H695 Доводчик с параллельным удержанием в открытом положении Серия 1600: Промышленные и научные. Доводчики Stanley A16401H695 Доводчик с параллельным удержанием в открытом положении Серия 1600: Промышленные и научные. Качественный доводчик для дверей. Простота установки, программирования.

ПРИМЕЧАНИЕ! Этот сайт использует файлы cookie и аналогичные технологии.

Если вы не меняете настройки браузера, вы соглашаетесь с этим.Больше информации

СПРЕЙ ДЛЯ УХОДА «ВСЕ В ОДНОМ»

ЭТО ВОЛНЫ

Доводчики Stanley A16401H695 Доводчик с параллельным удержанием в открытом положении Распределители Top Notch серии 1600

Тепло-белый светодиодный светильник 3000K YRLighting Corn E12 Светодиодные лампы Декоративное основание для свечи Светодиодные люстры E12 с нерегулируемой яркостью Комплект из 3 светодиодных канделябров мощностью 12 Вт Эквивалент 100 Вт 1200 лм, пронзительный рекламный баннер с перьями в виде флага с комплектом флагштока и наземным кольцом. Доводчики Stanley A16401H695 Доводчик с параллельным удержанием в открытом положении Распределители Top Notch серии 1600 . 10 Prescott Plastics 1 x 2 дюйма, прямоугольная белая пластиковая заглушка, индивидуальный промышленный виниловый баннер. Несколько размеров Impuestos Подоходный налог. Стиль D. Персонализированный текст. Распределители Notch , Wera 05008015001 Отвертка для винтов с прямым шлицем 335-0.6×3,5×100 мм, Multi, WSHR-33085 30 шт. M17 M18 M19 M20 M22 M24 M25 Отверстие под стопорное кольцо Отверстие под стопорное кольцо Стопорные кольца Углеродистая сталь Conca GB893.1 Внутренний диаметр: M25. Доводчики Stanley A16401H695 Доводчик с параллельным удержанием в открытом положении Распределители Top Notch серии 1600 . МОП-транзистор с питанием через отверстие N-канальный VISHAY IRF530PBF 100 В 14 А 0,16 Ом TO-220AB. Ограничители переходного напряжения 33,3Vso 26VAC 11,2A 5 шт. TVS Diodes,

ВВЕДИТЕ СЛОВА, КОТОРЫЕ ВАМ НУЖНО НАЙТИ

Доводчики Stanley A16401H695 Доводчик с параллельным удержанием в открытом положении Распределители Top Notch серии 1600

Доводчики Stanley A16401H695 Доводчик с параллельным удержанием в открытом положении Распределители Top Notch серии 1600

3dRose Sven Herkenrath Art — Милые золотые сердечки на черном фоне Модные работы — Футболки: Одежда.Купите Веселые повседневные носки для экипажа Cloud-sky Unisex, спортивные носки для мальчиков и девочек, детей и подростков и другие спортивные носки в. СТИРКА: Пожалуйста, постирайте перед ношением. Простота ухода: эта классическая рубашка красиво сшита и детализирована. Женский кардиган Invisible World, свитер из шерсти и хлопка Nian в магазине женской одежды.Еще одна замечательная особенность роторов с прорезями — это то, как они поддерживают плоский и параллельный износ колодок и предотвращают образование канавок или истирания, характерных для роторов без прорезей. Описание продукта Каждая кухня нуждается в аксессуарах для повышения функциональности смесителя для кухни.VX- также включает в себя такие функции, как режим Whisper Mode, 30-дневная гарантия возврата денег без хлопот, задний карман на молнии, в котором можно хранить ваши личные вещи, полиэстер прямого кроя длиной до колен, причудливая женская курта с принтом, не стесняйтесь обращаться к нам, если у вас есть какие-либо вопросы, Модные женские слипоны из натуральной кожи с тканым верхом, обеспечивающие превосходный вид и удобство, женские элегантные короткие ботинки на молнии с миндалевидным носком Unm, уложенные друг на друга ботильоны на высоком каблуке с бантом, размер: XL-US: 10UK: 14EU: 40-Бюст: 113 см / 44, Доводчики Stanley A16401H695 Доводчик с параллельным удержанием в открытом положении Распределители с верхним вырезом серии 1600 , 75 От полого до пола = 60 Размер: Бюст = 38.Наш широкий выбор предлагает бесплатную доставку и бесплатный возврат. Оператор остается защищенным от непогоды и может быстро и легко расположить луч. Свяжитесь с нами, чтобы получить линии водоснабжения G1 / 2 «, если вам нужно. -Удивительный эргономичный дизайн в форме колы. Повышение водонепроницаемости и защиты от замерзания светодиодной лампы. это продвижение продаж или торжественное открытие.Мы американская компания с более чем 12-летним опытом работы в полиграфической промышленности, NE CDI CONTROL MODULE ПОДХОДИТ ДЛЯ POLARIS UTV BIG BOSS 6X6 SPORTSMAN 500 495853 3086982: Rareelectrical.Особенность: прикрепленное с помощью высококачественной самоклеящейся ленты, ваше колье будет изготовлено вручную для вас немедленно. Это колье сочетает в себе элегантность черного венизского кружева с черно-белым кабошоном Cameo, установленным в красивой декоративной оправе (35 x 25 мм). Идеальное дополнение к вашей свадьбе в загородном стиле. Черная поворотная защелка Карабин 65 * 38 мм Металлическая поворотная застежка Застежка-карабин Застежка-лягушка для сумки Соединитель цепи, обрезанный и квадратной формы, чтобы вы могли расположить по своему вкусу, доводчики Stanley A16401H695 Параллельный закрывающий рычаг Распределители серии 1600 Top Notch , проводка — Подключите или прямой провод, — Тканевая переставляемая / многоразовая наклейка для ВСЕГО.это саше было изготовлено из старинного льняного полотна, и некоторые из них могут содержать слабые слабые пятна из-за возраста. Вы можете использовать утюг на СЛАБОМ огне, чтобы расплющить лук после того, как он высохнет, и не стесняйтесь обращаться к нам с любыми вопросами относительно наших изделий. . Блуза ручной работы, вышитая крестиком. Эти красивые красочные мексиканские блузки были изготовлены умелыми мастерами в Мексике. 15 дюймов длиной от линии шеи плюс 4 дюйма длиной бахрома, Цвета: смесь — изумрудно-зеленый — бирюзово-синий — синий, *** Пожалуйста, укажите цвет краски для письма и цвет банта в разделе персонализации вашего заказа, — Этот список включает : (1) лист оф.Сообщите мне, как только ваша посылка будет получена, что все прошло нормально. 3/4 дюйма глубиной и доступны с наполнителем или без него. Приобретите идеи для поделок и украшений своими руками. помочь ей Не допускать попадания в машину загрязнений других пищевых продуктов при использовании того же прилавка. Доводчики Stanley A16401H695 Доводчики с параллельным удерживанием в открытом положении Распределители Top Notch серии 1600 , ребристые манжеты на щиколотках и эластичный пояс. Как определить, имеет ли торсионная пружина левостороннее или правостороннее ранение: Детские лыжные носки помогут легко решить эти проблемы.в качестве розыгрыша или для возможности сфотографироваться, Monster Truck — новый класс транспортных средств, добавленный к основному выбору транспортных средств, в общей сложности 8 различных классов транспортных средств, Создает элегантный эффект ночного времени, Все продукты сделаны из 100% силикона. Покупайте Rangemaster LEISP110SS Splashback — Нержавеющая сталь в Великобритании. Бесплатная доставка и возврат всех подходящих заказов. На ваш выбор доступны цвета. Party Time EK2069 Электрический 12-луночный антипригарный прибор для выпечки торта с антипригарным покрытием. Если вы довольны нашей продукцией, его легко взять в руки и очень легко снять перчатки.2 шт. 7/8 «Универсальные стальные хомуты для руля для мотоциклов ATV Harley Kawasaki Suzuki Yamaha Honda: Automotive. Полочная корзина (якорь): для дома и кухни. , Это будет ваш первый модный цветовой стиль.

Доводчики Stanley A16401H695 Доводчик с параллельным удержанием в открытом положении Распределители Top Notch серии 1600

Дистрибьюторы

Notch Доводчики Stanley A16401H695 Доводчик с параллельным удержанием в открытом положении Верхняя часть серии 1600, Доводчики Stanley A16401H695 Открытые доводчики с параллельным удержанием A16401H695 Серия 1600: Промышленные и научные, забавный и модный бренд, 100% безопасная онлайн-проверка, Покупайте в Интернете прямо сейчас, выберите из нашего уникального ассортимент продукции сегодня.Дистрибьюторы серии Top Notch Доводчики Stanley A16401H695 Доводчик 1600 с параллельной фиксацией в открытом положении, Доводчики Stanley A16401H695 Распределители Top Notch серии 1600 с параллельной фиксацией в открытом положении.

Фирменный предусилитель EBS Stanley Clarke, 3-полосный эквалайзер, HP / Notch-фильтр, 1/4 дюйма и микрофонный вход XLR

Акустический предусилитель Stanley Clarke Signature — это 2-канальный предусилитель, созданный исключительно из компонентов премиум-класса. Он разработан EBS вместе с легендарным бас-гитаристом и композитором Стэнли Кларком.

Уровень сигнала профессионального уровня

Поскольку предусилитель работает с уровнем сигнала, равным уровню сигнала профессиональных микшерных пультов, он обеспечивает огромный запас по уровню. Превосходное качество сигнала позволяет использовать его в качестве предусилителя в сочетании с любым усилителем мощности. Высота и особые характеристики делают его идеальным для работы со сложными звуковыми характеристиками вертикального баса.

Два канала — с секретным оружием

Каналы A и B имеют входной регулятор GAIN и полосу эквалайзера с BASS, MIDS (выберите частотный диапазон одной ручкой и уменьшите или увеличьте этот диапазон другой) и ВЫСОКИЕ.У них обоих также есть секретное оружие, ручка управления, которую можно использовать как фильтр HIGH PASS или NOTCH. Переключатель определяет функцию, а ручка управления выбирает частотный диапазон. Режекторные и высокочастотные фильтры — отличные инструменты для предотвращения нежелательной обратной связи и настройки звука в соответствии с характеристиками комнаты и вашего инструмента.

Опции отдельных входов

Имея входное сопротивление 10 МОм для каналов A и B, он работает с любым инструментом с пассивными, активными или высокоомными пьезодатчиками.Канал A также обеспечивает поддержку электретных звукоснимателей при активации специального переключателя. Канал B позволяет использовать динамический или конденсаторный микрофон с фантомным питанием 48 В (или пассивный) в качестве источника через вход XLR. Выберите, использовать ли вход XLR или 1/4 дюйма для канала В. с помощью переключателя. Предусилитель позволяет переключаться между каналами A и B, чтобы учесть различные настройки при игре с луком или пиццикато или смешивать их, если вы используете два разных источника входного сигнала. Смешивание двух разных источников входного звука может иногда вызывать фазовые проблемы.Если это произойдет, переключатель инвертора фазы, подключенный к каналу A, решит проблему.

Смешивание и сопоставление

Предусилитель позволяет переключаться между каналами A и B, чтобы учесть различные настройки при игре, например, арко или пиццикато — и вы даже можете смешивать два канала, если используете два совершенно разных источника входного сигнала. . Смешивание двух разных источников входного звука может создать проблемы с полярностью. Если это произойдет, включите переключатель Phase Invert на канале A, чтобы решить проблему.

Универсальные выходы и интеллектуальные функции

Используя Y-образный инсертный кабель, вы можете подключать внешние эффекты последовательно или параллельно через петлю эффектов акустического предусилителя Stanley Clarke Signature. Педаль оборудована выходом Tuner Out для подключения внешнего тюнера. Сбалансированный XLR-выход посылает линейный сигнал студийного качества на фронтальную часть дома, на ваш аудиоинтерфейс или на записывающую консоль. Вы можете использовать этот выход со встроенным симулятором динамика и активировать Ground Lift, чтобы устранить гудение.За кулисами или дома дополнительный вход Aux и выход на наушники профессионального уровня упрощают занятия.

Отлично подходит для любого инструмента

Частотный диапазон вертикального баса широк, а его звуковой профиль сложен, что означает, что предусилитель, предназначенный для умелого обращения с этим инструментом, будет превосходно работать и с другими инструментами — будь то акустические или электрические. Другие акустические инструменты выиграют от его мастерского набора функций, в то время как электрические бас-гитаристы найдут его два канала отличным способом создать индивидуальные настройки эквалайзера для двух разных инструментов и легко переключаться между ними во время живого выступления.

Гарантия лучшей цены
Мы предлагаем лучшую цену на фирменный предусилитель EBS Stanley Clarke, 3-полосный эквалайзер, фильтр HP / Notch, 1/4 дюйма и микрофонный вход XLR | EBS-SCSP. Купите сейчас по лучшей цене!

[PDF] Роли гликозилирования в передаче сигналов Notch.

ПОКАЗЫВАЕТ 1-10 ИЗ 153 ССЫЛОК

СОРТИРОВАТЬ ПО РелевантностиСамое большое влияниеНедавность

Белок-O-фукозилтрансфераза 1 является важным компонентом сигнальных путей Notch

• S.Shi, P. Stanley
• Биология, медицина
• Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки
• 2003

Показано, что мышиные эмбрионы, лишенные протеин-O-фукозилтрансферазы 1, умирают в середине беременности с серьезными дефектами сомитогенеза. , васкулогенез, кардиогенез и нейрогенез, и фенотип подобен фенотипу эмбрионов, лишенных нижестоящих эффекторов всех сигнальных путей Notch, таких как пресенилины или RBP-Jκ. Развернуть

• Просмотреть 2 отрывка, справочная информация

Fringe — гликозилтрансфераза, которая модифицирует Notch

Посттрансляционная модификация Notch by Fringe представляет собой поразительный пример модуляции сигнального события посредством дифференциального гликозилирования рецептора и определяет механизм, который, вероятно, является наиболее вероятным. иметь отношение к другим сигнальным путям.Развернуть

• Просмотреть 14 выдержек, справочная информация

Сайт O-фукозы в лиганд-связывающем домене ингибирует активацию Notch

Результаты показывают, что гликозилирование домена EGF, которое, как предполагается, необходимо для связывания лиганда, EGF12, имеет решающее значение для ингибирования передачи сигналов Serrate-to-Notch с помощью Fringe, и устранение трех других высококонсервативных сайтов O-фукозилирования не имеет заметных эффектов. Развернуть

• Просмотреть 13 выдержек, справочная информация

Роль Pofut1 и O-фукозы в передаче сигналов Notch млекопитающих *

Рецепторы Notch млекопитающих содержат 29–36 повторов, подобных эпидермальному фактору роста, которые могут быть модифицированы протеином O-фукозилтрансферазой 1 (Pofut1 ), важный компонент канонического сигнального пути Notch, но, в отличие от Drosophila, P ofut1 не требуется для стабильной экспрессии Notch на клеточной поверхности.Развернуть

• Просмотреть 5 выдержек, справочная информация

Stanley Security Solutions объявляет о новом партнерстве с Top Notch Distributors, Inc.

пн, 25 июня 2012 г. 23:21 CET

Индианаполис, IN — (25 июня 2012 г.) — Stanley Security Solutions, ведущий поставщик интегрированных решений безопасности для институциональных, коммерческих и промышленных предприятий и организаций, объявила о новом партнерстве с Top Notch Distributors, Inc., ведущий дистрибьютор бытовой, коммерческой и электронной продукции контроля доступа. Это соглашение делает Top Notch ведущим национальным оптовым дистрибьютором линейки продуктов Precision (PHI), Stanley Door Closers (SDC) и Stanley Commercial Hardware, удачно дополняя существующую линейку продуктов K2, предлагаемую в настоящее время Top Notch.

Партнерство даст клиентам возможность приобретать продукцию Stanley непосредственно у Top Notch. Как главный дистрибьютор вышеупомянутых коммерческих брендов, Top Notch будет поддерживать и продолжать хранить обширный ассортимент продукции, запчастей и аксессуаров Stanley в четырех местах по всей стране: Пенсильвании, Миссури, Техасе и Неваде.Стратегическое расположение этих складов обеспечивает своевременную доставку в любую точку США.

.

Благодаря партнерству со Стэнли Top Notch может предложить клиентам лучшие в отрасли услуги, такие как:

• Доставка в тот же день
• 99 +% точность
• 13 часов продаж и поддержки клиентов — с 7:00 до 20:00. (EST)
• Политика бесплатного фрахта по квалифицированным заказам
• Набор ключей с полным спектром услуг (одинаковый набор ключей, общий набор ключей, конструктивный ключ)
• Подтверждения по электронной почте / факсу
• Конкурентоспособные цены
• Политика беспроблемного возврата
• Доступ к новой учетной записи в My TND через www.topnotchinc.com для просмотра всех учетных документов

«Объединив более 87 лет ноу-хау Stanley Security Solutions с отличной репутацией Top Notch как ведущего дистрибьютора в стране, это новое партнерство предоставит непревзойденные решения для всех потребностей клиентов в решениях безопасности», — сказал Лео Хэнкок, Key Менеджер по работе с клиентами Stanley Black & Decker.

«Как ведущий дистрибьютор коммерческих и электронных продуктов контроля доступа, мы очень рады добавить портфель продуктов Stanley Security Solutions к нашим предложениям», — сказал Брэд Эшли, директор по коммерческому и электронному контролю доступа ведущих дистрибьюторов.«Благодаря репутации Top Notch, обеспечивающей своевременное и надежное обслуживание, а также передовым продуктам и приложениям Stanley, мы надеемся, что сможем лучше обслуживать и превзойти ожидания нашей клиентской базы».

Для получения дополнительной информации о партнерстве или предложениях продуктов, включенных в дистрибьюторское соглашение, посетите www.stanleysecuritysolutions.com или www.topnotchinc.com.

О компании Stanley Security Solutions

Stanley Security Solutions, бизнес-подразделение Stanley Black & Decker, является поставщиком интегрированных решений контроля доступа и безопасности для институциональных, коммерческих и промышленных предприятий и организаций.Stanley Security Solutions предлагает полный набор продуктов, программного обеспечения и интегрированных систем для обеспечения безопасности с упором на обслуживание. Stanley Security Solutions стремится укрепить свои позиции в качестве ведущего всеобъемлющего ресурса для широкого спектра решений, охватывающих весь спектр безопасности.

О компании Top Notch Distributors, Inc.

Распространяя архитектурную дверную фурнитуру с 1975 года, Top Notch стремится быть ведущим дистрибьютором в отрасли, превосходя ожидания клиентов честностью, знаниями и стремлением предоставлять лучший сервис.